الملخص العربيتعتبر الأغنام على جانب كبير من الأهمية الاقتصادية والغذائية للإنسان، خاصة في الدول النامية ومنها مصر؛ فهي لا تشارك الإنسان غذائه حيث تحصل على غذائها من المواد العشبية والألياف التي لا يستطيع أن يتغذى عليها الإنسان وتحولها إلى بروتين غالى الثمن عالي القيمة الحيوية متوازن من حيث الطاقة والأملاح المعدنية والفيتامينات والأحماض الامينية الأساسية. ويمكن تجاوز الفجوة بين إنتاج اللحوم واستهلاكها عن طريق تحسين ورفع إنتاجية حيوانات المزرعة ومنها الأغنام. كما تعتبر الأغنام مصدرا مباشرا للدخل النقدي خاصة لصغار المربين عند الحاجة. ومع ذلك فلم تحظ هذه الحيوانات بالقدر الكافي من اهتمام الباحثين في الماضي.ويهدف هذا البحث إلى دراسة التباين الوراثى لبعض سلالات الأغنام في مصر على ثلاثة مستويات:الأول: على مستوى الدراسات السيتولوجية (دراسة الهيئة الكروموسومية Karyotyping )الثانى: على مستوى البروتين (التفريد الكهربى على الجيل عديد الاكريلاميد SDS-PAGE)الثالث: على مستوى الـDNA الجينومى (تحليل الـDNA بنظام الـRAPD-PCR).وقد أخضعت للدراسة في هذا البحث ثمانية من سلالات الأغنام التى تعيش في مصر منها أربع سلالات نقية هي اوسيمى و رحماني وبرقى (محلية مصريه) ورومانوف (روسية متأقلمة في مصر) واربعـة هجـن بيـن الأغنام المصـرية والاوربية هى : هجين CB1 (½ رحماني x ½ فنلندى)، هجيـن CB2 (½ رحمانى x ½ رومانوف)، هجين CB3 ( ¼ رحماني x ¾ رومانوف( ، هجين CB4 (¾ رحمانى x ¼ رومانوف) .أخذت عينات الدم من الوريد العنقي باستخدام سرنجات معقمة تحتوى هيبارين كمانع للتجلط. وتم مباشرة عمل مزرعة لعينات الدم الماخوذة من نعاج ثلاث سلالات محلية (اوسيمى و رحمانى وبرقى) تمهيدا لإعداد شرائح ميكروسكوبية لدراسة الهيئة الكروموسومية ، بينما اجرى الطرد المركزى للعينات الماخوذة من سبع سلالات (رحمانى وبرقى ورومانوف و الهجن الأربعة) وذلك لفصل طبقتى البلازما وخلايا الدم و تم تخزين البلازما على -20ºم لحين التفريد الكهربى للبروتين وتخزين خلايا الدم على -80ºم لحين استخلاص الـDNA وتحليله بنظام RAPD-PCR.ويمكن تلخيص النتائج المتحصل عليها من هذه الدراسة على النحو التالى:أولا: الدراسة السيتولوجية:أكدت الدراسة أن العدد الكلى للكروموسوماتXX) 54)=2n كروموسوم ، متمثلة في 27 زوجا متماثلا يمكن تمييزها على أساس موقع السنترومير إلى نوعين من الكروموسومات؛ الأول: وسطي السنترومير Metacentric ويشمل ثلاث أزواج (رقم 1و2و3) ، والثاني: السنترومير قريب من الطرف Acrocentric ويشمل 24 زوجا من الكروموسومات (من رقم 4 إلى 27 ) منهم زوج يعرف بكروموسوم الجنس (XX) وهو أكبرها حجما (رقم 27). كما أكدت الدراسة عدم وجود فروق بين الهيئة الكروموسومية لكل من السلالات المصرية المحلية (اوسيمى ورحمانى وبرقى). وهذا لا يقلل من أهمية هذا النوع من الدراسة حيث انه يعتبر على جانب كبير من الأهمية خاصة في كشف وتشخيص حالات التغيرات الكروموسومية سواء العددية او التركيبية.ثانيا: التباين الوراثى على مستوى البروتين :نوقشت حزم البروتين Protein bands الناتجة من التفريد الكهربي لبروتينات البلازما المستخلصة من سلالات الأغنام السبع تحت الدراسة على أساس تقسيمها إلى أربعة طرز:Monomorphic bands : وهى التي تظهر في جميع العيناتPolymorphic bands : وهى التي تظهر في بعض العينات وتغيب في البعض الآخر.Positive specific band : تظهر في عينة واحدة بينما تغيب في باقي العينات.Negative specific band : تغيب من عينة واحدة بينما تظهر في باقي العينات.ولا يصلح كل من الطرازين الأول والثاني للتمييز بين السلالات بينما الثالث والرابع يعتبران واسمات بيوكيميائية Biochemical markers مميزة للسلالات.وعلى هذا الأساس أمكن الحصول على العديد من صور التباين الوراثي فيما بين السبع تراكيب وراثية ، ويمكن تلخيص نتائج التفريد الكهربي للبروتين بنظام SDS-PAGE فيما يلى:كان العدد الكلى للحزم البروتينية 96 ، أنتجت السلالة الواحدة حوالي 13-16 حزمة.وجد من بين العدد الكلى لحزم البروتين 15 Positive specific band و حزمة واحدة Negative specific band تفيد في تمييز السلالة التي ظهرت بها عن باقي السلالات السبع تحت الدراسة.تميزت سلالة البرقى بوجود حزمتين وغياب واحدة من الحزم المتخصصةتميزت كل من سلالة الرحمانى والهجين 4 بوجود ثلاثة واسمات لكل منهم.تميزت كل من سلالة رومانوف و هجين 1 وهجين 3 بوجود واسمة وراثية متخصصة واحدة لكل منهم.الهجين 2 تميز بوجود اربع واسمات وراثية متخصصةبناء على درجة التماثل الوراثى Homogeneity ؛ وزعت سلالات الأغنام السبع المدروسة على اربع مجموعات: المجموعة الأولى وتشمل الهجين 2 ، المجموعة الثانية وتشمل رومانوف والهجين 1 والهجين 3 والمجموعة الثالثة وتشمل الهجين 4 والمجموعة الرابعة وتشمل سلالتي الرحمانى والبرقىأعلى درجة تباعد وراثي بين المجموعات (0.662) كانت مابين المجموعة الأولى والثالثة وايضا مابين المجموعة الثالثة والرابعة مما يشير إلى وجود اختلافات وراثية فيما بينهم. بينما ظهرت اقل قيمة للتباعد الوراثى (0.576) بين المجموعتين الثانية و الثالثة مما يدل على وجود علاقة قرابة وراثية عالية نسبيا بين السلالات التي تضمها هاتين المجموعتينتراوح معامل التماثل الوراثى من 0.000 إلى 0.630. ووجد أعلى معامل للتماثل (0.630) بين رومانوف وهجين 3 مما يدل على أن هاتين السلالتين هما أكثر الطرز الوراثية تماثلا. كما وجد أن اقل قيم معامل التماثل الوراثى كانت ما بين كل من سلالة البرقى والهجين 2 من ناحية وباقى السلالات من ناحية أخرىتراوحت قيم التباعد الوراثى من 9.00 إلى 35.0 ، ووجد ان أعلى قيمة للتباعد الوراثى بين السلالات (35.0) كانت بين سلالة البرقى والهجين 1 ، اما اقل القيم (9.00) وجدت بين سلالة الرحمانى وهجين 3 .ثالثا التباين الوراثى على مستوى الـ DNA الجزيئى :واسمات الـ RAPD فى السلالات النقية:نجح اثنين من البوادئ Primers (A10 , A17) في التكامل مع شظايا الـ DNA المستخلص من ثلاثة من سلالات الأغنام النقية (رحماني و رومانوف و برقى) ويمكن تلخيص نتائج تحليل الـ DNA بنظام الـ RAPD-PCR فيما يلى:أمكن الحصول على ثمانية حزم نتيجة تفاعل كل من البادئين مع الـ DNA المستخلص من السلالات الثلاثة.تراوح عدد الحزم الناتجة من 1 إلى 2 لكل سلالة ، كما تراوح الوزن الجزيئى لشظايا الـ DNA الناتجة بين 676 و425 .يمكن اعتبار البادئ A10 بادئا مميزا لسلالة الرومانوف ولكن ليس كذلك للسلالات الاخرى، بينما يمكن استعمال البادئ A17 كبادئ مميز لكل من السلالات الثلاث.يمكن تمييز سلالة الرحمانى بغياب الحزمة رقم 2 ذات الوزن الجزيئى 578 مع البادئ A17 التي ظهرت في باقي السلالات، اما سلالة الرومانوف فقد تميزت بوجود حزمتين متخصصتين ،الأولى حزمة رقم 1 ذات الوزن الجزيئى 628 مع البادئ A10 والثانية رقم 1 ذات الوزن الجزيئى 676 مع البادئ A17 ، على حين تميزت سلالة البرقى بوجود الحزمة المميزة رقم 3 وزنها الجزيئى 455 مع البادئ A17واسمات الـ RAPD فى الهجن:نجح سبعة من البوادئ العشوائية ( A02, A04, A07, A09, A10, A12 and A17) في التكامل مع شظايا من الـ DNA المستخلص من السلالات الهجينية الأربعة (CB1, CB2, CB3 and CB4) ويمكن تلخيص نتائج تحليل الـDNA بنظام الـ RAPD كما يلى:1- امكن الحصول على 60 حزمة كنواتج للـ PCR من تفاعل كل من البوادئ السبعة مع كل من الهجن الأربعة ،2- تراوح عدد الحزم لكل بادئ من 4 إلى 16 ولكل حيوان من 1 إلى 5 ،3- كما تراوحت الأوزان الجزيئية للشظايا الناتجة من 83 إلى 14054- على مستوى الهجن الاربعة أمكن الحصول على 28 حزمة متخصصة نتيجة التفاعل مع البوادئ المختلفة . اثنين منهم كانتا واسمات وراثية سالبة Negative specific marker و26 كانت واسمات وراثية موجبة Positive specific marker تمثل 43.3% من العدد الكلى للحزم الناتجة .5- تميز CB1 بوجود 12 واسمة موجبة وواسمة واحدة سالبة،6- كما تميز CB2 بوجود 9 واسمات موجبة وواحدة سالبة،7- بينما تميز CB3 بوجود ثلاثة واسمات موجبة ،8- اما CB4 فقد تميز بوجود واسمتين موجبتين .9- أنتج البادئ A02 اكبر عدد من الواسمات المتخصصة (7 موجبة و 1 سالبة) ،10- يليه في ذلك البادئان A04 , A12 (7 واسمات موجبة لكل متهما) ،11- بينما أنتج كل من البادئين A09, A17 اقل عدد من الواسمات الوراثية ( 3 موجبة لكل متهما) . على حين لم ينتج اى من البادئينA07, A10 اى واسمات وراثية مع اى من الهجن الأربعة تحت الدراسة .12- يبدو أن البادئ A02 هو الأفضل من بين البوادئ المستخدمة حيث انتج أعلى عدد من الواسمات المتخصصة ،13- علاوة على انه أعطى واسمات متخصصة لكل من الهجن الاربعة المدروسة ؛ لذلك يمكن اعتباره بادئا مميزا ممتازا لكل من الهجن تحت الدراسة .14- أشارت نتائج تحليل دليل التماثل الوراثي Similarity index إلى أن أعلى الاختلافات الوراثية كانت بين CB1 وكل من CB3 وCB4 بينما كانت اقل الاختلافات الوراثية ما بين CB3 و CB4 كما وجد أن أعلى تماثل وراثي كان بين CB3 و CB4 بينما كان اقل تماثل وراثي بين CB1 وكل من الهجن الثلاث الأخرى .الخلاصــة:يمكن أن نخلص من نتائج هذه الدراسة إلى ما يلى :1- دراسة الهيئة الكروموسومية Karyotyping لم تظهر فروق واضحة بين سلالات الأغنام المصرية كاملة الخصوبة والخالية من الأمراض. وهذا لا يقلل من أهمية هذا النوع من الدراسة حيث انه يعتبر على جانب كبير من الأهمية خاصة في كشف وتشخيص حالات التغيرات الكروموسومية سواء العددية او التركيبية.2- تدل نتائج هذه الدراسة أن التفريد الكهربي للبروتين بنظام SDS-PAGE وكذلك تحيل الـ DNA بنظام الـ RAPD-PCR يمكن أن يسهم في تمييز سلالات الأغنام وتحديد البصمة الوراثية لها وايضا التفريق بين تلك السلالات3- أكدت نتائج هذه الدراسة على اهمية كل من التفريد الكهربي للبروتين بنظام SDS-PAGE و تحليل الـ DNA بنظام RAPD-PCR في كشف وتقدير التباين الوراثى على مستوى البروتين والـDNA في الأغنام وكذلك تقدير العلاقة الوراثية بين السلالات المختلفة.4- نظرا لما أمكن التوصل إليه من وجود اختلافات وراثية فيما بين سلالات الأغنام المدروسة الأمر الذي يفتح الباب أمام المزيد من الدراسات المستقبلية باستخدام كل من التقنيات الحديثة مثل التفريد الكهربي للبروتين بنظام PAGE وتحليل الـ DNA بنظام الـ RAPD-PCR للإمداد بالمزيد من الواسمات الوراثية لكل سلالة التي يمكن أن تكون مفيدة في تعريف السلالات وتحديد البصمة الوراثية لها وكذلك تقدير درجة القرابة او التباعد الوراثى فيما بينها ؛ مما يدعم قاعدة المعلومات في الوراثة الجزيئية التي هى ضرورية في برامج تحسين وتربية الأغنام في مصر .الملخص العربيتعتبر الأغنام على جانب كبير من الأهمية الاقتصادية والغذائية للإنسان، خاصة في الدول النامية ومنها مصر؛ فهي لا تشارك الإنسان غذائه حيث تحصل على غذائها من المواد العشبية والألياف التي لا يستطيع أن يتغذى عليها الإنسان وتحولها إلى بروتين غالى الثمن عالي القيمة الحيوية متوازن من حيث الطاقة والأملاح المعدنية والفيتامينات والأحماض الامينية الأساسية. ويمكن تجاوز الفجوة بين إنتاج اللحوم واستهلاكها عن طريق تحسين ورفع إنتاجية حيوانات المزرعة ومنها الأغنام. كما تعتبر الأغنام مصدرا مباشرا للدخل النقدي خاصة لصغار المربين عند الحاجة. ومع ذلك فلم تحظ هذه الحيوانات بالقدر الكافي من اهتمام الباحثين في الماضي.ويهدف هذا البحث إلى دراسة التباين الوراثى لبعض سلالات الأغنام في مصر على ثلاثة مستويات:الأول: على مستوى الدراسات السيتولوجية (دراسة الهيئة الكروموسومية Karyotyping )الثانى: على مستوى البروتين (التفريد الكهربى على الجيل عديد الاكريلاميد SDS-PAGE)الثالث: على مستوى الـDNA الجينومى (تحليل الـDNA بنظام الـRAPD-PCR).وقد أخضعت للدراسة في هذا البحث ثمانية من سلالات الأغنام التى تعيش في مصر منها أربع سلالات نقية هي اوسيمى و رحماني وبرقى (محلية مصريه) ورومانوف (روسية متأقلمة في مصر) واربعـة هجـن بيـن الأغنام المصـرية والاوربية هى : هجين CB1 (½ رحماني x ½ فنلندى)، هجيـن CB2 (½ رحمانى x ½ رومانوف)، هجين CB3 ( ¼ رحماني x ¾ رومانوف( ، هجين CB4 (¾ رحمانى x ¼ رومانوف) .أخذت عينات الدم من الوريد العنقي باستخدام سرنجات معقمة تحتوى هيبارين كمانع للتجلط. وتم مباشرة عمل مزرعة لعينات الدم الماخوذة من نعاج ثلاث سلالات محلية (اوسيمى و رحمانى وبرقى) تمهيدا لإعداد شرائح ميكروسكوبية لدراسة الهيئة الكروموسومية ، بينما اجرى الطرد المركزى للعينات الماخوذة من سبع سلالات (رحمانى وبرقى ورومانوف و الهجن الأربعة) وذلك لفصل طبقتى البلازما وخلايا الدم و تم تخزين البلازما على -20ºم لحين التفريد الكهربى للبروتين وتخزين خلايا الدم على -80ºم لحين استخلاص الـDNA وتحليله بنظام RAPD-PCR.ويمكن تلخيص النتائج المتحصل عليها من هذه الدراسة على النحو التالى:أولا: الدراسة السيتولوجية:أكدت الدراسة أن العدد الكلى للكروموسوماتXX) 54)=2n كروموسوم ، متمثلة في 27 زوجا متماثلا يمكن تمييزها على أساس موقع السنترومير إلى نوعين من الكروموسومات؛ الأول: وسطي السنترومير Metacentric ويشمل ثلاث أزواج (رقم 1و2و3) ، والثاني: السنترومير قريب من الطرف Acrocentric ويشمل 24 زوجا من الكروموسومات (من رقم 4 إلى 27 ) منهم زوج يعرف بكروموسوم الجنس (XX) وهو أكبرها حجما (رقم 27). كما أكدت الدراسة عدم وجود فروق بين الهيئة الكروموسومية لكل من السلالات المصرية المحلية (اوسيمى ورحمانى وبرقى). وهذا لا يقلل من أهمية هذا النوع من الدراسة حيث انه يعتبر على جانب كبير من الأهمية خاصة في كشف وتشخيص حالات التغيرات الكروموسومية سواء العددية او التركيبية.ثانيا: التباين الوراثى على مستوى البروتين :نوقشت حزم البروتين Protein bands الناتجة من التفريد الكهربي لبروتينات البلازما المستخلصة من سلالات الأغنام السبع تحت الدراسة على أساس تقسيمها إلى أربعة طرز:Monomorphic bands : وهى التي تظهر في جميع العيناتPolymorphic bands : وهى التي تظهر في بعض العينات وتغيب في البعض الآخر.Positive specific band : تظهر في عينة واحدة بينما تغيب في باقي العينات.Negative specific band : تغيب من عينة واحدة بينما تظهر في باقي العينات.ولا يصلح كل من الطرازين الأول والثاني للتمييز بين السلالات بينما الثالث والرابع يعتبران واسمات بيوكيميائية Biochemical markers مميزة للسلالات.وعلى هذا الأساس أمكن الحصول على العديد من صور التباين الوراثي فيما بين السبع تراكيب وراثية ، ويمكن تلخيص نتائج التفريد الكهربي للبروتين بنظام SDS-PAGE فيما يلى:كان العدد الكلى للحزم البروتينية 96 ، أنتجت السلالة الواحدة حوالي 13-16 حزمة.وجد من بين العدد الكلى لحزم البروتين 15 Positive specific band و حزمة واحدة Negative specific band تفيد في تمييز السلالة التي ظهرت بها عن باقي السلالات السبع تحت الدراسة.تميزت سلالة البرقى بوجود حزمتين وغياب واحدة من الحزم المتخصصةتميزت كل من سلالة الرحمانى والهجين 4 بوجود ثلاثة واسمات لكل منهم.تميزت كل من سلالة رومانوف و هجين 1 وهجين 3 بوجود واسمة وراثية متخصصة واحدة لكل منهم.الهجين 2 تميز بوجود اربع واسمات وراثية متخصصةبناء على درجة التماثل الوراثى Homogeneity ؛ وزعت سلالات الأغنام السبع المدروسة على اربع مجموعات: المجموعة الأولى وتشمل الهجين 2 ، المجموعة الثانية وتشمل رومانوف والهجين 1 والهجين 3 والمجموعة الثالثة وتشمل الهجين 4 والمجموعة الرابعة وتشمل سلالتي الرحمانى والبرقىأعلى درجة تباعد وراثي بين المجموعات (0.662) كانت مابين المجموعة الأولى والثالثة وايضا مابين المجموعة الثالثة والرابعة مما يشير إلى وجود اختلافات وراثية فيما بينهم. بينما ظهرت اقل قيمة للتباعد الوراثى (0.576) بين المجموعتين الثانية و الثالثة مما يدل على وجود علاقة قرابة وراثية عالية نسبيا بين السلالات التي تضمها هاتين المجموعتينتراوح معامل التماثل الوراثى من 0.000 إلى 0.630. ووجد أعلى معامل للتماثل (0.630) بين رومانوف وهجين 3 مما يدل على أن هاتين السلالتين هما أكثر الطرز الوراثية تماثلا. كما وجد أن اقل قيم معامل التماثل الوراثى كانت ما بين كل من سلالة البرقى والهجين 2 من ناحية وباقى السلالات من ناحية أخرىتراوحت قيم التباعد الوراثى من 9.00 إلى 35.0 ، ووجد ان أعلى قيمة للتباعد الوراثى بين السلالات (35.0) كانت بين سلالة البرقى والهجين 1 ، اما اقل القيم (9.00) وجدت بين سلالة الرحمانى وهجين 3 .ثالثا التباين الوراثى على مستوى الـ DNA الجزيئى :واسمات الـ RAPD فى السلالات النقية:نجح اثنين من البوادئ Primers (A10 , A17) في التكامل مع شظايا الـ DNA المستخلص من ثلاثة من سلالات الأغنام النقية (رحماني و رومانوف و برقى) ويمكن تلخيص نتائج تحليل الـ DNA بنظام الـ RAPD-PCR فيما يلى:أمكن الحصول على ثمانية حزم نتيجة تفاعل كل من البادئين مع الـ DNA المستخلص من السلالات الثلاثة.تراوح عدد الحزم الناتجة من 1 إلى 2 لكل سلالة ، كما تراوح الوزن الجزيئى لشظايا الـ DNA الناتجة بين 676 و425 .يمكن اعتبار البادئ A10 بادئا مميزا لسلالة الرومانوف ولكن ليس كذلك للسلالات الاخرى، بينما يمكن استعمال البادئ A17 كبادئ مميز لكل من السلالات الثلاث.يمكن تمييز سلالة الرحمانى بغياب الحزمة رقم 2 ذات الوزن الجزيئى 578 مع البادئ A17 التي ظهرت في باقي السلالات، اما سلالة الرومانوف فقد تميزت بوجود حزمتين متخصصتين ،الأولى حزمة رقم 1 ذات الوزن الجزيئى 628 مع البادئ A10 والثانية رقم 1 ذات الوزن الجزيئى 676 مع البادئ A17 ، على حين تميزت سلالة البرقى بوجود الحزمة المميزة رقم 3 وزنها الجزيئى 455 مع البادئ A17واسمات الـ RAPD فى الهجن:نجح سبعة من البوادئ العشوائية ( A02, A04, A07, A09, A10, A12 and A17) في التكامل مع شظايا من الـ DNA المستخلص من السلالات الهجينية الأربعة (CB1, CB2, CB3 and CB4) ويمكن تلخيص نتائج تحليل الـDNA بنظام الـ RAPD كما يلى:1- امكن الحصول على 60 حزمة كنواتج للـ PCR من تفاعل كل من البوادئ السبعة مع كل من الهجن الأربعة ،2- تراوح عدد الحزم لكل بادئ من 4 إلى 16 ولكل حيوان من 1 إلى 5 ،3- كما تراوحت الأوزان الجزيئية للشظايا الناتجة من 83 إلى 14054- على مستوى الهجن الاربعة أمكن الحصول على 28 حزمة متخصصة نتيجة التفاعل مع البوادئ المختلفة . اثنين منهم كانتا واسمات وراثية سالبة Negative specific marker و26 كانت واسمات وراثية موجبة Positive specific marker تمثل 43.3% من العدد الكلى للحزم الناتجة .5- تميز CB1 بوجود 12 واسمة موجبة وواسمة واحدة سالبة،6- كما تميز CB2 بوجود 9 واسمات موجبة وواحدة سالبة،7- بينما تميز CB3 بوجود ثلاثة واسمات موجبة ،8- اما CB4 فقد تميز بوجود واسمتين موجبتين .9- أنتج البادئ A02 اكبر عدد من الواسمات المتخصصة (7 موجبة و 1 سالبة) ،10- يليه في ذلك البادئان A04 , A12 (7 واسمات موجبة لكل متهما) ،11- بينما أنتج كل من البادئين A09, A17 اقل عدد من الواسمات الوراثية ( 3 موجبة لكل متهما) . على حين لم ينتج اى من البادئينA07, A10 اى واسمات وراثية مع اى من الهجن الأربعة تحت الدراسة .12- يبدو أن البادئ A02 هو الأفضل من بين البوادئ المستخدمة حيث انتج أعلى عدد من الواسمات المتخصصة ،13- علاوة على انه أعطى واسمات متخصصة لكل من الهجن الاربعة المدروسة ؛ لذلك يمكن اعتباره بادئا مميزا ممتازا لكل من الهجن تحت الدراسة .14- أشارت نتائج تحليل دليل التماثل الوراثي Similarity index إلى أن أعلى الاختلافات الوراثية كانت بين CB1 وكل من CB3 وCB4 بينما كانت اقل الاختلافات الوراثية ما بين CB3 و CB4 كما وجد أن أعلى تماثل وراثي كان بين CB3 و CB4 بينما كان اقل تماثل وراثي بين CB1 وكل من الهجن الثلاث الأخرى .الخلاصــة:يمكن أن نخلص من نتائج هذه الدراسة إلى ما يلى :1- دراسة الهيئة الكروموسومية Karyotyping لم تظهر فروق واضحة بين سلالات الأغنام المصرية كاملة الخصوبة والخالية من الأمراض. وهذا لا يقلل من أهمية هذا النوع من الدراسة حيث انه يعتبر على جانب كبير من الأهمية خاصة في كشف وتشخيص حالات التغيرات الكروموسومية سواء العددية او التركيبية.2- تدل نتائج هذه الدراسة أن التفريد الكهربي للبروتين بنظام SDS-PAGE وكذلك تحيل الـ DNA بنظام الـ RAPD-PCR يمكن أن يسهم في تمييز سلالات الأغنام وتحديد البصمة الوراثية لها وايضا التفريق بين تلك السلالات3- أكدت نتائج هذه الدراسة على اهمية كل من التفريد الكهربي للبروتين بنظام SDS-PAGE و تحليل الـ DNA بنظام RAPD-PCR في كشف وتقدير التباين الوراثى على مستوى البروتين والـDNA في الأغنام وكذلك تقدير العلاقة الوراثية بين السلالات المختلفة.4- نظرا لما أمكن التوصل إليه من وجود اختلافات وراثية فيما بين سلالات الأغنام المدروسة الأمر الذي يفتح الباب أمام المزيد من الدراسات المستقبلية باستخدام كل من التقنيات الحديثة مثل التفريد الكهربي للبروتين بنظام PAGE وتحليل الـ DNA بنظام الـ RAPD-PCR للإمداد بالمزيد من الواسمات الوراثية لكل سلالة التي يمكن أن تكون مفيدة في تعريف السلالات وتحديد البصمة الوراثية لها وكذلك تقدير درجة القرابة او التباعد الوراثى فيما بينها ؛ مما يدعم قاعدة المعلومات في الوراثة الجزيئية التي هى ضرورية في برامج تحسين وتربية الأغنام في مصر .الملخص العربيتعتبر الأغنام على جانب كبير من الأهمية الاقتصادية والغذائية للإنسان، خاصة في الدول النامية ومنها مصر؛ فهي لا تشارك الإنسان غذائه حيث تحصل على غذائها من المواد العشبية والألياف التي لا يستطيع أن يتغذى عليها الإنسان وتحولها إلى بروتين غالى الثمن عالي القيمة الحيوية متوازن من حيث الطاقة والأملاح المعدنية والفيتامينات والأحماض الامينية الأساسية. ويمكن تجاوز الفجوة بين إنتاج اللحوم واستهلاكها عن طريق تحسين ورفع إنتاجية حيوانات المزرعة ومنها الأغنام. كما تعتبر الأغنام مصدرا مباشرا للدخل النقدي خاصة لصغار المربين عند الحاجة. ومع ذلك فلم تحظ هذه الحيوانات بالقدر الكافي من اهتمام الباحثين في الماضي.ويهدف هذا البحث إلى دراسة التباين الوراثى لبعض سلالات الأغنام في مصر على ثلاثة مستويات:الأول: على مستوى الدراسات السيتولوجية (دراسة الهيئة الكروموسومية Karyotyping )الثانى: على مستوى البروتين (التفريد الكهربى على الجيل عديد الاكريلاميد SDS-PAGE)الثالث: على مستوى الـDNA الجينومى (تحليل الـDNA بنظام الـRAPD-PCR).وقد أخضعت للدراسة في هذا البحث ثمانية من سلالات الأغنام التى تعيش في مصر منها أربع سلالات نقية هي اوسيمى و رحماني وبرقى (محلية مصريه) ورومانوف (روسية متأقلمة في مصر) واربعـة هجـن بيـن الأغنام المصـرية والاوربية هى : هجين CB1 (½ رحماني x ½ فنلندى)، هجيـن CB2 (½ رحمانى x ½ رومانوف)، هجين CB3 ( ¼ رحماني x ¾ رومانوف( ، هجين CB4 (¾ رحمانى x ¼ رومانوف) .أخذت عينات الدم من الوريد العنقي باستخدام سرنجات معقمة تحتوى هيبارين كمانع للتجلط. وتم مباشرة عمل مزرعة لعينات الدم الماخوذة من نعاج ثلاث سلالات محلية (اوسيمى و رحمانى وبرقى) تمهيدا لإعداد شرائح ميكروسكوبية لدراسة الهيئة الكروموسومية ، بينما اجرى الطرد المركزى للعينات الماخوذة من سبع سلالات (رحمانى وبرقى ورومانوف و الهجن الأربعة) وذلك لفصل طبقتى البلازما وخلايا الدم و تم تخزين البلازما على -20ºم لحين التفريد الكهربى للبروتين وتخزين خلايا الدم على -80ºم لحين استخلاص الـDNA وتحليله بنظام RAPD-PCR.ويمكن تلخيص النتائج المتحصل عليها من هذه الدراسة على النحو التالى:أولا: الدراسة السيتولوجية:أكدت الدراسة أن العدد الكلى للكروموسوماتXX) 54)=2n كروموسوم ، متمثلة في 27 زوجا متماثلا يمكن تمييزها على أساس موقع السنترومير إلى نوعين من الكروموسومات؛ الأول: وسطي السنترومير Metacentric ويشمل ثلاث أزواج (رقم 1و2و3) ، والثاني: السنترومير قريب من الطرف Acrocentric ويشمل 24 زوجا من الكروموسومات (من رقم 4 إلى 27 ) منهم زوج يعرف بكروموسوم الجنس (XX) وهو أكبرها حجما (رقم 27). كما أكدت الدراسة عدم وجود فروق بين الهيئة الكروموسومية لكل من السلالات المصرية المحلية (اوسيمى ورحمانى وبرقى). وهذا لا يقلل من أهمية هذا النوع من الدراسة حيث انه يعتبر على جانب كبير من الأهمية خاصة في كشف وتشخيص حالات التغيرات الكروموسومية سواء العددية او التركيبية.ثانيا: التباين الوراثى على مستوى البروتين :نوقشت حزم البروتين Protein bands الناتجة من التفريد الكهربي لبروتينات البلازما المستخلصة من سلالات الأغنام السبع تحت الدراسة على أساس تقسيمها إلى أربعة طرز:Monomorphic bands : وهى التي تظهر في جميع العيناتPolymorphic bands : وهى التي تظهر في بعض العينات وتغيب في البعض الآخر.Positive specific band : تظهر في عينة واحدة بينما تغيب في باقي العينات.Negative specific band : تغيب من عينة واحدة بينما تظهر في باقي العينات.ولا يصلح كل من الطرازين الأول والثاني للتمييز بين السلالات بينما الثالث والرابع يعتبران واسمات بيوكيميائية Biochemical markers مميزة للسلالات.وعلى هذا الأساس أمكن الحصول على العديد من صور التباين الوراثي فيما بين السبع تراكيب وراثية ، ويمكن تلخيص نتائج التفريد الكهربي للبروتين بنظام SDS-PAGE فيما يلى:كان العدد الكلى للحزم البروتينية 96 ، أنتجت السلالة الواحدة حوالي 13-16 حزمة.وجد من بين العدد الكلى لحزم البروتين 15 Positive specific band و حزمة واحدة Negative specific band تفيد في تمييز السلالة التي ظهرت بها عن باقي السلالات السبع تحت الدراسة.تميزت سلالة البرقى بوجود حزمتين وغياب واحدة من الحزم المتخصصةتميزت كل من سلالة الرحمانى والهجين 4 بوجود ثلاثة واسمات لكل منهم.تميزت كل من سلالة رومانوف و هجين 1 وهجين 3 بوجود واسمة وراثية متخصصة واحدة لكل منهم.الهجين 2 تميز بوجود اربع واسمات وراثية متخصصةبناء على درجة التماثل الوراثى Homogeneity ؛ وزعت سلالات الأغنام السبع المدروسة على اربع مجموعات: المجموعة الأولى وتشمل الهجين 2 ، المجموعة الثانية وتشمل رومانوف والهجين 1 والهجين 3 والمجموعة الثالثة وتشمل الهجين 4 والمجموعة الرابعة وتشمل سلالتي الرحمانى والبرقىأعلى درجة تباعد وراثي بين المجموعات (0.662) كانت مابين المجموعة الأولى والثالثة وايضا مابين المجموعة الثالثة والرابعة مما يشير إلى وجود اختلافات وراثية فيما بينهم. بينما ظهرت اقل قيمة للتباعد الوراثى (0.576) بين المجموعتين الثانية و الثالثة مما يدل على وجود علاقة قرابة وراثية عالية نسبيا بين السلالات التي تضمها هاتين المجموعتينتراوح معامل التماثل الوراثى من 0.000 إلى 0.630. ووجد أعلى معامل للتماثل (0.630) بين رومانوف وهجين 3 مما يدل على أن هاتين السلالتين هما أكثر الطرز الوراثية تماثلا. كما وجد أن اقل قيم معامل التماثل الوراثى كانت ما بين كل من سلالة البرقى والهجين 2 من ناحية وباقى السلالات من ناحية أخرىتراوحت قيم التباعد الوراثى من 9.00 إلى 35.0 ، ووجد ان أعلى قيمة للتباعد الوراثى بين السلالات (35.0) كانت بين سلالة البرقى والهجين 1 ، اما اقل القيم (9.00) وجدت بين سلالة الرحمانى وهجين 3 .ثالثا التباين الوراثى على مستوى الـ DNA الجزيئى :واسمات الـ RAPD فى السلالات النقية:نجح اثنين من البوادئ Primers (A10 , A17) في التكامل مع شظايا الـ DNA المستخلص من ثلاثة من سلالات الأغنام النقية (رحماني و رومانوف و برقى) ويمكن تلخيص نتائج تحليل الـ DNA بنظام الـ RAPD-PCR فيما يلى:أمكن الحصول على ثمانية حزم نتيجة تفاعل كل من البادئين مع الـ DNA المستخلص من السلالات الثلاثة.تراوح عدد الحزم الناتجة من 1 إلى 2 لكل سلالة ، كما تراوح الوزن الجزيئى لشظايا الـ DNA الناتجة بين 676 و425 .يمكن اعتبار البادئ A10 بادئا مميزا لسلالة الرومانوف ولكن ليس كذلك للسلالات الاخرى، بينما يمكن استعمال البادئ A17 كبادئ مميز لكل من السلالات الثلاث.يمكن تمييز سلالة الرحمانى بغياب الحزمة رقم 2 ذات الوزن الجزيئى 578 مع البادئ A17 التي ظهرت في باقي السلالات، اما سلالة الرومانوف فقد تميزت بوجود حزمتين متخصصتين ،الأولى حزمة رقم 1 ذات الوزن الجزيئى 628 مع البادئ A10 والثانية رقم 1 ذات الوزن الجزيئى 676 مع البادئ A17 ، على حين تميزت سلالة البرقى بوجود الحزمة المميزة رقم 3 وزنها الجزيئى 455 مع البادئ A17واسمات الـ RAPD فى الهجن:نجح سبعة من البوادئ العشوائية ( A02, A04, A07, A09, A10, A12 and A17) في التكامل مع شظايا من الـ DNA المستخلص من السلالات الهجينية الأربعة (CB1, CB2, CB3 and CB4) ويمكن تلخيص نتائج تحليل الـDNA بنظام الـ RAPD كما يلى:1- امكن الحصول على 60 حزمة كنواتج للـ PCR من تفاعل كل من البوادئ السبعة مع كل من الهجن الأربعة ،2- تراوح عدد الحزم لكل بادئ من 4 إلى 16 ولكل حيوان من 1 إلى 5 ،3- كما تراوحت الأوزان الجزيئية للشظايا الناتجة من 83 إلى 14054- على مستوى الهجن الاربعة أمكن الحصول على 28 حزمة متخصصة نتيجة التفاعل مع البوادئ المختلفة . اثنين منهم كانتا واسمات وراثية سالبة Negative specific marker و26 كانت واسمات وراثية موجبة Positive specific marker تمثل 43.3% من العدد الكلى للحزم الناتجة .5- تميز CB1 بوجود 12 واسمة موجبة وواسمة واحدة سالبة،6- كما تميز CB2 بوجود 9 واسمات موجبة وواحدة سالبة،7- بينما تميز CB3 بوجود ثلاثة واسمات موجبة ،8- اما CB4 فقد تميز بوجود واسمتين موجبتين .9- أنتج البادئ A02 اكبر عدد من الواسمات المتخصصة (7 موجبة و 1 سالبة) ،10- يليه في ذلك البادئان A04 , A12 (7 واسمات موجبة لكل متهما) ،11- بينما أنتج كل من البادئين A09, A17 اقل عدد من الواسمات الوراثية ( 3 موجبة لكل متهما) . على حين لم ينتج اى من البادئينA07, A10 اى واسمات وراثية مع اى من الهجن الأربعة تحت الدراسة .12- يبدو أن البادئ A02 هو الأفضل من بين البوادئ المستخدمة حيث انتج أعلى عدد من الواسمات المتخصصة ،13- علاوة على انه أعطى واسمات متخصصة لكل من الهجن الاربعة المدروسة ؛ لذلك يمكن اعتباره بادئا مميزا ممتازا لكل من الهجن تحت الدراسة .14- أشارت نتائج تحليل دليل التماثل الوراثي Similarity index إلى أن أعلى الاختلافات الوراثية كانت بين CB1 وكل من CB3 وCB4 بينما كانت اقل الاختلافات الوراثية ما بين CB3 و CB4 كما وجد أن أعلى تماثل وراثي كان بين CB3 و CB4 بينما كان اقل تماثل وراثي بين CB1 وكل من الهجن الثلاث الأخرى .الخلاصــة:يمكن أن نخلص من نتائج هذه الدراسة إلى ما يلى :1- دراسة الهيئة الكروموسومية Karyotyping لم تظهر فروق واضحة بين سلالات الأغنام المصرية كاملة الخصوبة والخالية من الأمراض. وهذا لا يقلل من أهمية هذا النوع من الدراسة حيث انه يعتبر على جانب كبير من الأهمية خاصة في كشف وتشخيص حالات التغيرات الكروموسومية سواء العددية او التركيبية.2- تدل نتائج هذه الدراسة أن التفريد الكهربي للبروتين بنظام SDS-PAGE وكذلك تحيل الـ DNA بنظام الـ RAPD-PCR يمكن أن يسهم في تمييز سلالات الأغنام وتحديد البصمة الوراثية لها وايضا التفريق بين تلك السلالات3- أكدت نتائج هذه الدراسة على اهمية كل من التفريد الكهربي للبروتين بنظام SDS-PAGE و تحليل الـ DNA بنظام RAPD-PCR في كشف وتقدير التباين الوراثى على مستوى البروتين والـDNA في الأغنام وكذلك تقدير العلاقة الوراثية بين السلالات المختلفة.4- نظرا لما أمكن التوصل إليه من وجود اختلافات وراثية فيما بين سلالات الأغنام المدروسة الأمر الذي يفتح الباب أمام المزيد من الدراسات المستقبلية باستخدام كل من التقنيات الحديثة مثل التفريد الكهربي للبروتين بنظام PAGE وتحليل الـ DNA بنظام الـ RAPD-PCR للإمداد بالمزيد من الواسمات الوراثية لكل سلالة التي يمكن أن تكون مفيدة في تعريف السلالات وتحديد البصمة الوراثية لها وكذلك تقدير درجة القرابة او التباعد الوراثى فيما بينها ؛ مما يدعم قاعدة المعلومات في الوراثة الجزيئية التي هى ضرورية في برامج تحسين وتربية الأغنام في مصر .الملخص العربيتعتبر الأغنام على جانب كبير من الأهمية الاقتصادية والغذائية للإنسان، خاصة في الدول النامية ومنها مصر؛ فهي لا تشارك الإنسان غذائه حيث تحصل على غذائها من المواد العشبية والألياف التي لا يستطيع أن يتغذى عليها الإنسان وتحولها إلى بروتين غالى الثمن عالي القيمة الحيوية متوازن من حيث الطاقة والأملاح المعدنية والفيتامينات والأحماض الامينية الأساسية. ويمكن تجاوز الفجوة بين إنتاج اللحوم واستهلاكها عن طريق تحسين ورفع إنتاجية حيوانات المزرعة ومنها الأغنام. كما تعتبر الأغنام مصدرا مباشرا للدخل النقدي خاصة لصغار المربين عند الحاجة. ومع ذلك فلم تحظ هذه الحيوانات بالقدر الكافي من اهتمام الباحثين في الماضي.ويهدف هذا البحث إلى دراسة التباين الوراثى لبعض سلالات الأغنام في مصر على ثلاثة مستويات:الأول: على مستوى الدراسات السيتولوجية (دراسة الهيئة الكروموسومية Karyotyping )الثانى: على مستوى البروتين (التفريد الكهربى على الجيل عديد الاكريلاميد SDS-PAGE)الثالث: على مستوى الـDNA الجينومى (تحليل الـDNA بنظام الـRAPD-PCR).وقد أخضعت للدراسة في هذا البحث ثمانية من سلالات الأغنام التى تعيش في مصر منها أربع سلالات نقية هي اوسيمى و رحماني وبرقى (محلية مصريه) ورومانوف (روسية متأقلمة في مصر) واربعـة هجـن بيـن الأغنام المصـرية والاوربية هى : هجين CB1 (½ رحماني x ½ فنلندى)، هجيـن CB2 (½ رحمانى x ½ رومانوف)، هجين CB3 ( ¼ رحماني x ¾ رومانوف( ، هجين CB4 (¾ رحمانى x ¼ رومانوف) .أخذت عينات الدم من الوريد العنقي باستخدام سرنجات معقمة تحتوى هيبارين كمانع للتجلط. وتم مباشرة عمل مزرعة لعينات الدم الماخوذة من نعاج ثلاث سلالات محلية (اوسيمى و رحمانى وبرقى) تمهيدا لإعداد شرائح ميكروسكوبية لدراسة الهيئة الكروموسومية ، بينما اجرى الطرد المركزى للعينات الماخوذة من سبع سلالات (رحمانى وبرقى ورومانوف و الهجن الأربعة) وذلك لفصل طبقتى البلازما وخلايا الدم و تم تخزين البلازما على -20ºم لحين التفريد الكهربى للبروتين وتخزين خلايا الدم على -80ºم لحين استخلاص الـDNA وتحليله بنظام RAPD-PCR.ويمكن تلخيص النتائج المتحصل عليها من هذه الدراسة على النحو التالى:أولا: الدراسة السيتولوجية:أكدت الدراسة أن العدد الكلى للكروموسوماتXX) 54)=2n كروموسوم ، متمثلة في 27 زوجا متماثلا يمكن تمييزها على أساس موقع السنترومير إلى نوعين من الكروموسومات؛ الأول: وسطي السنترومير Metacentric ويشمل ثلاث أزواج (رقم 1و2و3) ، والثاني: السنترومير قريب من الطرف Acrocentric ويشمل 24 زوجا من الكروموسومات (من رقم 4 إلى 27 ) منهم زوج يعرف بكروموسوم الجنس (XX) وهو أكبرها حجما (رقم 27). كما أكدت الدراسة عدم وجود فروق بين الهيئة الكروموسومية لكل من السلالات المصرية المحلية (اوسيمى ورحمانى وبرقى). وهذا لا يقلل من أهمية هذا النوع من الدراسة حيث انه يعتبر على جانب كبير من الأهمية خاصة في كشف وتشخيص حالات التغيرات الكروموسومية سواء العددية او التركيبية.ثانيا: التباين الوراثى على مستوى البروتين :نوقشت حزم البروتين Protein bands الناتجة من التفريد الكهربي لبروتينات البلازما المستخلصة من سلالات الأغنام السبع تحت الدراسة على أساس تقسيمها إلى أربعة طرز:Monomorphic bands : وهى التي تظهر في جميع العيناتPolymorphic bands : وهى التي تظهر في بعض العينات وتغيب في البعض الآخر.Positive specific band : تظهر في عينة واحدة بينما تغيب في باقي العينات.Negative specific band : تغيب من عينة واحدة بينما تظهر في باقي العينات.ولا يصلح كل من الطرازين الأول والثاني للتمييز بين السلالات بينما الثالث والرابع يعتبران واسمات بيوكيميائية Biochemical markers مميزة للسلالات.وعلى هذا الأساس أمكن الحصول على العديد من صور التباين الوراثي فيما بين السبع تراكيب وراثية ، ويمكن تلخيص نتائج التفريد الكهربي للبروتين بنظام SDS-PAGE فيما يلى:كان العدد الكلى للحزم البروتينية 96 ، أنتجت السلالة الواحدة حوالي 13-16 حزمة.وجد من بين العدد الكلى لحزم البروتين 15 Positive specific band و حزمة واحدة Negative specific band تفيد في تمييز السلالة التي ظهرت بها عن باقي السلالات السبع تحت الدراسة.تميزت سلالة البرقى بوجود حزمتين وغياب واحدة من الحزم المتخصصةتميزت كل من سلالة الرحمانى والهجين 4 بوجود ثلاثة واسمات لكل منهم.تميزت كل من سلالة رومانوف و هجين 1 وهجين 3 بوجود واسمة وراثية متخصصة واحدة لكل منهم.الهجين 2 تميز بوجود اربع واسمات وراثية متخصصةبناء على درجة التماثل الوراثى Homogeneity ؛ وزعت سلالات الأغنام السبع المدروسة على اربع مجموعات: المجموعة الأولى وتشمل الهجين 2 ، المجموعة الثانية وتشمل رومانوف والهجين 1 والهجين 3 والمجموعة الثالثة وتشمل الهجين 4 والمجموعة الرابعة وتشمل سلالتي الرحمانى والبرقىأعلى درجة تباعد وراثي بين المجموعات (0.662) كانت مابين المجموعة الأولى والثالثة وايضا مابين المجموعة الثالثة والرابعة مما يشير إلى وجود اختلافات وراثية فيما بينهم. بينما ظهرت اقل قيمة للتباعد الوراثى (0.576) بين المجموعتين الثانية و الثالثة مما يدل على وجود علاقة قرابة وراثية عالية نسبيا بين السلالات التي تضمها هاتين المجموعتينتراوح معامل التماثل الوراثى من 0.000 إلى 0.630. ووجد أعلى معامل للتماثل (0.630) بين رومانوف وهجين 3 مما يدل على أن هاتين السلالتين هما أكثر الطرز الوراثية تماثلا. كما وجد أن اقل قيم معامل التماثل الوراثى كانت ما بين كل من سلالة البرقى والهجين 2 من ناحية وباقى السلالات من ناحية أخرىتراوحت قيم التباعد الوراثى من 9.00 إلى 35.0 ، ووجد ان أعلى قيمة للتباعد الوراثى بين السلالات (35.0) كانت بين سلالة البرقى والهجين 1 ، اما اقل القيم (9.00) وجدت بين سلالة الرحمانى وهجين 3 .ثالثا التباين الوراثى على مستوى الـ DNA الجزيئى :واسمات الـ RAPD فى السلالات النقية:نجح اثنين من البوادئ Primers (A10 , A17) في التكامل مع شظايا الـ DNA المستخلص من ثلاثة من سلالات الأغنام النقية (رحماني و رومانوف و برقى) ويمكن تلخيص نتائج تحليل الـ DNA بنظام الـ RAPD-PCR فيما يلى:أمكن الحصول على ثمانية حزم نتيجة تفاعل كل من البادئين مع الـ DNA المستخلص من السلالات الثلاثة.تراوح عدد الحزم الناتجة من 1 إلى 2 لكل سلالة ، كما تراوح الوزن الجزيئى لشظايا الـ DNA الناتجة بين 676 و425 .يمكن اعتبار البادئ A10 بادئا مميزا لسلالة الرومانوف ولكن ليس كذلك للسلالات الاخرى، بينما يمكن استعمال البادئ A17 كبادئ مميز لكل من السلالات الثلاث.يمكن تمييز سلالة الرحمانى بغياب الحزمة رقم 2 ذات الوزن الجزيئى 578 مع البادئ A17 التي ظهرت في باقي السلالات، اما سلالة الرومانوف فقد تميزت بوجود حزمتين متخصصتين ،الأولى حزمة رقم 1 ذات الوزن الجزيئى 628 مع البادئ A10 والثانية رقم 1 ذات الوزن الجزيئى 676 مع البادئ A17 ، على حين تميزت سلالة البرقى بوجود الحزمة المميزة رقم 3 وزنها الجزيئى 455 مع البادئ A17واسمات الـ RAPD فى الهجن:نجح سبعة من البوادئ العشوائية ( A02, A04, A07, A09, A10, A12 and A17) في التكامل مع شظايا من الـ DNA المستخلص من السلالات الهجينية الأربعة (CB1, CB2, CB3 and CB4) ويمكن تلخيص نتائج تحليل الـDNA بنظام الـ RAPD كما يلى:1- امكن الحصول على 60 حزمة كنواتج للـ PCR من تفاعل كل من البوادئ السبعة مع كل من الهجن الأربعة ،2- تراوح عدد الحزم لكل بادئ من 4 إلى 16 ولكل حيوان من 1 إلى 5 ،3- كما تراوحت الأوزان الجزيئية للشظايا الناتجة من 83 إلى 14054- على مستوى الهجن الاربعة أمكن الحصول على 28 حزمة متخصصة نتيجة التفاعل مع البوادئ المختلفة . اثنين منهم كانتا واسمات وراثية سالبة Negative specific marker و26 كانت واسمات وراثية موجبة Positive specific marker تمثل 43.3% من العدد الكلى للحزم الناتجة .5- تميز CB1 بوجود 12 واسمة موجبة وواسمة واحدة سالبة،6- كما تميز CB2 بوجود 9 واسمات موجبة وواحدة سالبة،7- بينما تميز CB3 بوجود ثلاثة واسمات موجبة ،8- اما CB4 فقد تميز بوجود واسمتين موجبتين .9- أنتج البادئ A02 اكبر عدد من الواسمات المتخصصة (7 موجبة و 1 سالبة) ،10- يليه في ذلك البادئان A04 , A12 (7 واسمات موجبة لكل متهما) ،11- بينما أنتج كل من البادئين A09, A17 اقل عدد من الواسمات الوراثية ( 3 موجبة لكل متهما) . على حين لم ينتج اى من البادئينA07, A10 اى واسمات وراثية مع اى من الهجن الأربعة تحت الدراسة .12- يبدو أن البادئ A02 هو الأفضل من بين البوادئ المستخدمة حيث انتج أعلى عدد من الواسمات المتخصصة ،13- علاوة على انه أعطى واسمات متخصصة لكل من الهجن الاربعة المدروسة ؛ لذلك يمكن اعتباره بادئا مميزا ممتازا لكل من الهجن تحت الدراسة .14- أشارت نتائج تحليل دليل التماثل الوراثي Similarity index إلى أن أعلى الاختلافات الوراثية كانت بين CB1 وكل من CB3 وCB4 بينما كانت اقل الاختلافات الوراثية ما بين CB3 و CB4 كما وجد أن أعلى تماثل وراثي كان بين CB3 و CB4 بينما كان اقل تماثل وراثي بين CB1 وكل من الهجن الثلاث الأخرى .الخلاصــة:يمكن أن نخلص من نتائج هذه الدراسة إلى ما يلى :1- دراسة الهيئة الكروموسومية Karyotyping لم تظهر فروق واضحة بين سلالات الأغنام المصرية كاملة الخصوبة والخالية من الأمراض. وهذا لا يقلل من أهمية هذا النوع من الدراسة حيث انه يعتبر على جانب كبير من الأهمية خاصة في كشف وتشخيص حالات التغيرات الكروموسومية سواء العددية او التركيبية.2- تدل نتائج هذه الدراسة أن التفريد الكهربي للبروتين بنظام SDS-PAGE وكذلك تحيل الـ DNA بنظام الـ RAPD-PCR يمكن أن يسهم في تمييز سلالات الأغنام وتحديد البصمة الوراثية لها وايضا التفريق بين تلك السلالات3- أكدت نتائج هذه الدراسة على اهمية كل من التفريد الكهربي للبروتين بنظام SDS-PAGE و تحليل الـ DNA بنظام RAPD-PCR في كشف وتقدير التباين الوراثى على مستوى البروتين والـDNA في الأغنام وكذلك تقدير العلاقة الوراثية بين السلالات المختلفة.4- نظرا لما أمكن التوصل إليه من وجود اختلافات وراثية فيما بين سلالات الأغنام المدروسة الأمر الذي يفتح الباب أمام المزيد من الدراسات المستقبلية باستخدام كل من التقنيات الحديثة مثل التفريد الكهربي للبروتين بنظام PAGE وتحليل الـ DNA بنظام الـ RAPD-PCR للإمداد بالمزيد من الواسمات الوراثية لكل سلالة التي يمكن أن تكون مفيدة في تعريف السلالات وتحديد البصمة الوراثية لها وكذلك تقدير درجة القرابة او التباعد الوراثى فيما بينها ؛ مما يدعم قاعدة المعلومات في الوراثة الجزيئية التي هى ضرورية في برامج تحسين وتربية الأغنام في مصر .الملخص العربيتعتبر الأغنام على جانب كبير من الأهمية الاقتصادية والغذائية للإنسان، خاصة في الدول النامية ومنها مصر؛ فهي لا تشارك الإنسان غذائه حيث تحصل على غذائها من المواد العشبية والألياف التي لا يستطيع أن يتغذى عليها الإنسان وتحولها إلى بروتين غالى الثمن عالي القيمة الحيوية متوازن من حيث الطاقة والأملاح المعدنية والفيتامينات والأحماض الامينية الأساسية. ويمكن تجاوز الفجوة بين إنتاج اللحوم واستهلاكها عن طريق تحسين ورفع إنتاجية حيوانات المزرعة ومنها الأغنام. كما تعتبر الأغنام مصدرا مباشرا للدخل النقدي خاصة لصغار المربين عند الحاجة. ومع ذلك فلم تحظ هذه الحيوانات بالقدر الكافي من اهتمام الباحثين في الماضي.ويهدف هذا البحث إلى دراسة التباين الوراثى لبعض سلالات الأغنام في مصر على ثلاثة مستويات:الأول: على مستوى الدراسات السيتولوجية (دراسة الهيئة الكروموسومية Karyotyping )الثانى: على مستوى البروتين (التفريد الكهربى على الجيل عديد الاكريلاميد SDS-PAGE)الثالث: على مستوى الـDNA الجينومى (تحليل الـDNA بنظام الـRAPD-PCR).وقد أخضعت للدراسة في هذا البحث ثمانية من سلالات الأغنام التى تعيش في مصر منها أربع سلالات نقية هي اوسيمى و رحماني وبرقى (محلية مصريه) ورومانوف (روسية متأقلمة في مصر) واربعـة هجـن بيـن الأغنام المصـرية والاوربية هى : هجين CB1 (½ رحماني x ½ فنلندى)، هجيـن CB2 (½ رحمانى x ½ رومانوف)، هجين CB3 ( ¼ رحماني x ¾ رومانوف( ، هجين CB4 (¾ رحمانى x ¼ رومانوف) .أخذت عينات الدم من الوريد العنقي باستخدام سرنجات معقمة تحتوى هيبارين كمانع للتجلط. وتم مباشرة عمل مزرعة لعينات الدم الماخوذة من نعاج ثلاث سلالات محلية (اوسيمى و رحمانى وبرقى) تمهيدا لإعداد شرائح ميكروسكوبية لدراسة الهيئة الكروموسومية ، بينما اجرى الطرد المركزى للعينات الماخوذة من سبع سلالات (رحمانى وبرقى ورومانوف و الهجن الأربعة) وذلك لفصل طبقتى البلازما وخلايا الدم و تم تخزين البلازما على -20ºم لحين التفريد الكهربى للبروتين وتخزين خلايا الدم على -80ºم لحين استخلاص الـDNA وتحليله بنظام RAPD-PCR.ويمكن تلخيص النتائج المتحصل عليها من هذه الدراسة على النحو التالى:أولا: الدراسة السيتولوجية:أكدت الدراسة أن العدد الكلى للكروموسوماتXX) 54)=2n كروموسوم ، متمثلة في 27 زوجا متماثلا يمكن تمييزها على أساس موقع السنترومير إلى نوعين من الكروموسومات؛ الأول: وسطي السنترومير Metacentric ويشمل ثلاث أزواج (رقم 1و2و3) ، والثاني: السنترومير قريب من الطرف Acrocentric ويشمل 24 زوجا من الكروموسومات (من رقم 4 إلى 27 ) منهم زوج يعرف بكروموسوم الجنس (XX) وهو أكبرها حجما (رقم 27). كما أكدت الدراسة عدم وجود فروق بين الهيئة الكروموسومية لكل من السلالات المصرية المحلية (اوسيمى ورحمانى وبرقى). وهذا لا يقلل من أهمية هذا النوع من الدراسة حيث انه يعتبر على جانب كبير من الأهمية خاصة في كشف وتشخيص حالات التغيرات الكروموسومية سواء العددية او التركيبية.ثانيا: التباين الوراثى على مستوى البروتين :نوقشت حزم البروتين Protein bands الناتجة من التفريد الكهربي لبروتينات البلازما المستخلصة من سلالات الأغنام السبع تحت الدراسة على أساس تقسيمها إلى أربعة طرز:Monomorphic bands : وهى التي تظهر في جميع العيناتPolymorphic bands : وهى التي تظهر في بعض العينات وتغيب في البعض الآخر.Positive specific band : تظهر في عينة واحدة بينما تغيب في باقي العينات.Negative specific band : تغيب من عينة واحدة بينما تظهر في باقي العينات.ولا يصلح كل من الطرازين الأول والثاني للتمييز بين السلالات بينما الثالث والرابع يعتبران واسمات بيوكيميائية Biochemical markers مميزة للسلالات.وعلى هذا الأساس أمكن الحصول على العديد من صور التباين الوراثي فيما بين السبع تراكيب وراثية ، ويمكن تلخيص نتائج التفريد الكهربي للبروتين بنظام SDS-PAGE فيما يلى:كان العدد الكلى للحزم البروتينية 96 ، أنتجت السلالة الواحدة حوالي 13-16 حزمة.وجد من بين العدد الكلى لحزم البروتين 15 Positive specific band و حزمة واحدة Negative specific band تفيد في تمييز السلالة التي ظهرت بها عن باقي السلالات السبع تحت الدراسة.تميزت سلالة البرقى بوجود حزمتين وغياب واحدة من الحزم المتخصصةتميزت كل من سلالة الرحمانى والهجين 4 بوجود ثلاثة واسمات لكل منهم.تميزت كل من سلالة رومانوف و هجين 1 وهجين 3 بوجود واسمة وراثية متخصصة واحدة لكل منهم.الهجين 2 تميز بوجود اربع واسمات وراثية متخصصةبناء على درجة التماثل الوراثى Homogeneity ؛ وزعت سلالات الأغنام السبع المدروسة على اربع مجموعات: المجموعة الأولى وتشمل الهجين 2 ، المجموعة الثانية وتشمل رومانوف والهجين 1 والهجين 3 والمجموعة الثالثة وتشمل الهجين 4 والمجموعة الرابعة وتشمل سلالتي الرحمانى والبرقىأعلى درجة تباعد وراثي بين المجموعات (0.662) كانت مابين المجموعة الأولى والثالثة وايضا مابين المجموعة الثالثة والرابعة مما يشير إلى وجود اختلافات وراثية فيما بينهم. بينما ظهرت اقل قيمة للتباعد الوراثى (0.576) بين المجموعتين الثانية و الثالثة مما يدل على وجود علاقة قرابة وراثية عالية نسبيا بين السلالات التي تضمها هاتين المجموعتينتراوح معامل التماثل الوراثى من 0.000 إلى 0.630. ووجد أعلى معامل للتماثل (0.630) بين رومانوف وهجين 3 مما يدل على أن هاتين السلالتين هما أكثر الطرز الوراثية تماثلا. كما وجد أن اقل قيم معامل التماثل الوراثى كانت ما بين كل من سلالة البرقى والهجين 2 من ناحية وباقى السلالات من ناحية أخرىتراوحت قيم التباعد الوراثى من 9.00 إلى 35.0 ، ووجد ان أعلى قيمة للتباعد الوراثى بين السلالات (35.0) كانت بين سلالة البرقى والهجين 1 ، اما اقل القيم (9.00) وجدت بين سلالة الرحمانى وهجين 3 .ثالثا التباين الوراثى على مستوى الـ DNA الجزيئى :واسمات الـ RAPD فى السلالات النقية:نجح اثنين من البوادئ Primers (A10 , A17) في التكامل مع شظايا الـ DNA المستخلص من ثلاثة من سلالات الأغنام النقية (رحماني و رومانوف و برقى) ويمكن تلخيص نتائج تحليل الـ DNA بنظام الـ RAPD-PCR فيما يلى:أمكن الحصول على ثمانية حزم نتيجة تفاعل كل من البادئين مع الـ DNA المستخلص من السلالات الثلاثة.تراوح عدد الحزم الناتجة من 1 إلى 2 لكل سلالة ، كما تراوح الوزن الجزيئى لشظايا الـ DNA الناتجة بين 676 و425 .يمكن اعتبار البادئ A10 بادئا مميزا لسلالة الرومانوف ولكن ليس كذلك للسلالات الاخرى، بينما يمكن استعمال البادئ A17 كبادئ مميز لكل من السلالات الثلاث.يمكن تمييز سلالة الرحمانى بغياب الحزمة رقم 2 ذات الوزن الجزيئى 578 مع البادئ A17 التي ظهرت في باقي السلالات، اما سلالة الرومانوف فقد تميزت بوجود حزمتين متخصصتين ،الأولى حزمة رقم 1 ذات الوزن الجزيئى 628 مع البادئ A10 والثانية رقم 1 ذات الوزن الجزيئى 676 مع البادئ A17 ، على حين تميزت سلالة البرقى بوجود الحزمة المميزة رقم 3 وزنها الجزيئى 455 مع البادئ A17واسمات الـ RAPD فى الهجن:نجح سبعة من البوادئ العشوائية ( A02, A04, A07, A09, A10, A12 and A17) في التكامل مع شظايا من الـ DNA المستخلص من السلالات الهجينية الأربعة (CB1, CB2, CB3 and CB4) ويمكن تلخيص نتائج تحليل الـDNA بنظام الـ RAPD كما يلى:1- امكن الحصول على 60 حزمة كنواتج للـ PCR من تفاعل كل من البوادئ السبعة مع كل من الهجن الأربعة ،2- تراوح عدد الحزم لكل بادئ من 4 إلى 16 ولكل حيوان من 1 إلى 5 ،3- كما تراوحت الأوزان الجزيئية للشظايا الناتجة من 83 إلى 14054- على مستوى الهجن الاربعة أمكن الحصول على 28 حزمة متخصصة نتيجة التفاعل مع البوادئ المختلفة . اثنين منهم كانتا واسمات وراثية سالبة Negative specific marker و26 كانت واسمات وراثية موجبة Positive specific marker تمثل 43.3% من العدد الكلى للحزم الناتجة .5- تميز CB1 بوجود 12 واسمة موجبة وواسمة واحدة سالبة،6- كما تميز CB2 بوجود 9 واسمات موجبة وواحدة سالبة،7- بينما تميز CB3 بوجود ثلاثة واسمات موجبة ،8- اما CB4 فقد تميز بوجود واسمتين موجبتين .9- أنتج البادئ A02 اكبر عدد من الواسمات المتخصصة (7 موجبة و 1 سالبة) ،10- يليه في ذلك البادئان A04 , A12 (7 واسمات موجبة لكل متهما) ،11- بينما أنتج كل من البادئين A09, A17 اقل عدد من الواسمات الوراثية ( 3 موجبة لكل متهما) . على حين لم ينتج اى من البادئينA07, A10 اى واسمات وراثية مع اى من الهجن الأربعة تحت الدراسة .12- يبدو أن البادئ A02 هو الأفضل من بين البوادئ المستخدمة حيث انتج أعلى عدد من الواسمات المتخصصة ،13- علاوة على انه أعطى واسمات متخصصة لكل من الهجن الاربعة المدروسة ؛ لذلك يمكن اعتباره بادئا مميزا ممتازا لكل من الهجن تحت الدراسة .14- أشارت نتائج تحليل دليل التماثل الوراثي Similarity index إلى أن أعلى الاختلافات الوراثية كانت بين CB1 وكل من CB3 وCB4 بينما كانت اقل الاختلافات الوراثية ما بين CB3 و CB4 كما وجد أن أعلى تماثل وراثي كان بين CB3 و CB4 بينما كان اقل تماثل وراثي بين CB1 وكل من الهجن الثلاث الأخرى .الخلاصــة:يمكن أن نخلص من نتائج هذه الدراسة إلى ما يلى :1- دراسة الهيئة الكروموسومية Karyotyping لم تظهر فروق واضحة بين سلالات الأغنام المصرية كاملة الخصوبة والخالية من الأمراض. وهذا لا يقلل من أهمية هذا النوع من الدراسة حيث انه يعتبر على جانب كبير من الأهمية خاصة في كشف وتشخيص حالات التغيرات الكروموسومية سواء العددية او التركيبية.2- تدل نتائج هذه الدراسة أن التفريد الكهربي للبروتين بنظام SDS-PAGE وكذلك تحيل الـ DNA بنظام الـ RAPD-PCR يمكن أن يسهم في تمييز سلالات الأغنام وتحديد البصمة الوراثية لها وايضا التفريق بين تلك السلالات3- أكدت نتائج هذه الدراسة على اهمية كل من التفريد الكهربي للبروتين بنظام SDS-PAGE و تحليل الـ DNA بنظام RAPD-PCR في كشف وتقدير التباين الوراثى على مستوى البروتين والـDNA في الأغنام وكذلك تقدير العلاقة الوراثية بين السلالات المختلفة.4- نظرا لما أمكن التوصل إليه من وجود اختلافات وراثية فيما بين سلالات الأغنام المدروسة الأمر الذي يفتح الباب أمام المزيد من الدراسات المستقبلية باستخدام كل من التقنيات الحديثة مثل التفريد الكهربي للبروتين بنظام PAGE وتحليل الـ DNA بنظام الـ RAPD-PCR للإمداد بالمزيد من الواسمات الوراثية لكل سلالة التي يمكن أن تكون مفيدة في تعريف السلالات وتحديد البصمة الوراثية لها وكذلك تقدير درجة القرابة او التباعد الوراثى فيما بينها ؛ مما يدعم قاعدة المعلومات في الوراثة الجزيئية التي هى ضرورية في برامج تحسين وتربية الأغنام في مصر .